國產(chǎn)液相色譜柱的使用維護以及注意事項的簡單分析

更新時間：2017-08-11

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國產(chǎn)液相色譜柱的使用和維護注意事項

國產(chǎn)液相色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會降低柱效，縮短使用壽命甚至損壞，在色譜操作過程中,需要注意下列問題,以維護色譜柱。

①避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動，溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應該緩慢進行，在閥進樣時的轉(zhuǎn)動不能過緩。

②應逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?/div>

③一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去柱內(nèi)的雜質(zhì)，否則反沖會迅速降低柱效。

④選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一預柱，分析柱是鍵合硅膠，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠＂飽和＂，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

⑤避免將基質(zhì)復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱骨需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱．國產(chǎn)液相色譜柱一般是填有固定相的短柱．保護柱可以而且應該經(jīng)常更換。

⑥經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)，在進行清洗時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50-75ml。下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為參考：正相硅膠柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷（或氯仿）和甲醇依次沖洗，然后再以相反順序依次沖洗，所有溶劑都必;須嚴格脫水。甲醇能洗去殘留的強極性雜質(zhì)，已烷使硅膠表面重新活化。

反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿）依次沖洗，再以相反順序依次沖洗。如果下一步分析用的流動?相不含緩沖液，那么可以省略zui后一步用水沖洗。一氯甲烷能洗支殘留的非極性雜質(zhì)。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混全溶液能除去類脂。有時也注射二甲亞砜數(shù)次。此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1％）梯度洗能除去蛋白質(zhì)污染。

陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗，除去交換性能強的鹽，然后用水、甲醇、水依次沖洗。

⑦保存色譜柱時應將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。

⑧國產(chǎn)液相色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片被堵塞，這時應更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M行清洗；另一種可能是大分子進入柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。